HPLC常見(jiàn)問(wèn)題和解決方法總匯
 
壓力異常
 
操作壓力的變化往往是故障的征兆。從下表中找出所觀(guān)察到的現象，并在右側的列表中參考相應的解決方法。
 

A、        沒(méi)有壓力顯示，沒(méi)有流動(dòng)相流動(dòng)

原 因	解決方法
1、電源問(wèn)題	1、接通電源，開(kāi)機
2、保險絲被燒壞	2、更換保險絲
3、控制器設定不正確或設定失敗	3、a、采取恰當的設定 b、修理或更換控制器
4、柱塞桿折斷	4、更換柱塞桿
5、泵頭內有空氣	5、溶劑脫氣、啟動(dòng)泵抽出空氣
6、流動(dòng)相不足	6、a、補充流動(dòng)相 b、更換入口濾頭
7、單向閥損壞	7、更換單向閥
8、漏液	8、擰緊或更換手緊接頭

 

B、         流動(dòng)相流動(dòng)正常，但沒(méi)有壓力顯示

原 因	解決方法
1、儀表?yè)p壞	1、更換儀表
2、壓力傳感器損壞	2、更換壓力傳感器

 

C、        壓力持續偏高

原 因	解決方法
1、流速設定過(guò)高	1、調整流速設定
2、柱前篩板堵塞	2、a、在允許情況下反沖色譜柱 b、更換篩板 c、更換色譜柱
3、流動(dòng)相使用不當或緩沖鹽的結晶沉淀	3、a、使用恰當的流動(dòng)相 b、沖洗色譜柱
4、色譜柱選擇不當	4、選擇恰當的色譜柱
5、進(jìn)樣閥損壞	5、清洗或更換進(jìn)樣閥
6、柱溫過(guò)低	6、提高溫度
7、控制器失常	7、修理或更換控制器
8、保護柱阻塞	8、清洗或更換保護柱
9、在線(xiàn)過(guò)濾器阻塞	9、清洗或更換在線(xiàn)過(guò)濾器

 

D、        壓力持續偏低

原 因	解決方法
1、流速設定過(guò)低	1、調整流速
2、系統漏液	2、確定漏液位置并維修
3、色譜柱選擇不當	3、選擇恰當的色譜柱
4、柱溫過(guò)高	4、降低溫度
5、控制器失常	5、維修或更換控制器

 

E、         壓力不斷上升

原 因	解決方法
1、見(jiàn)列表C	1、見(jiàn)列表C

 

F、         壓力降為零

原 因	解決方法
1、見(jiàn)列表A、B	1、見(jiàn)列表A、B

 

G、        壓力不斷下降，但不回零

原 因	解決方法
1、見(jiàn)列表D	1、見(jiàn)列表D

 

H、        壓力波動(dòng)

原 因	解決方法
1、泵中有氣體	1、a、溶劑脫氣 b、從泵中除去氣體
2、單向閥損壞	2、更換單向閥
3、泵密封損壞	3、更換泵密封
4、脫氣不充分	4、a、溶劑脫氣 b、改變脫氣方法（使用在線(xiàn)脫氣法等）
5、系統漏液	5、確定漏液位置并維修
6、使用梯度洗脫	6、由于流動(dòng)相粘度的變化引起的壓力波動(dòng)

 
漏  液
 
    通常可以通過(guò)擰緊或更換管路接頭來(lái)解決漏液的問(wèn)題。但值得注意的是過(guò)份擰緊會(huì )導致金屬接頭的漏液和塑料接頭的磨損。如果通過(guò)稍微擰緊接頭不能解決漏液的問(wèn)題，就必須將接頭取下，檢查是否損壞（例如，卡套損壞、密封表面有雜質(zhì)）；損壞的接頭應該更換掉。
 

A、        接頭處漏液

原 因	解決方法
1、接頭松動(dòng)	1、擰緊
2、接頭磨損	2、更換
3、接頭過(guò)緊	3、a、擰松，再重新擰緊 b、更換
4、接頭被污染	4、a、拆下清洗 b、更換
5、部件不匹配	5、使用同一品牌的配件

 

B、         泵漏液

原 因	解決方法
1、單向閥松動(dòng)	1、a、擰緊單向閥（不必擰的過(guò)緊） b、更換單向閥
2、接頭松動(dòng)	2、擰緊接頭（不必擰的過(guò)緊）
3、混合器密封損壞	3、a、更換混合器密封 b、更換混合器
4、泵密封損壞	4、維修或更換泵密封件
5、壓力傳感器損壞	5、維修或更換壓力傳感器
6、脈沖阻尼器損壞	6、更換脈沖阻尼器
7、比例閥損壞	7、a、檢查隔膜，如果漏液立即更換 b、檢查手緊接頭，損壞的立即更換
8、放空閥的損壞	8、a、擰緊放空閥 b、更換放空閥

 

C、        進(jìn)樣閥漏液

原 因	解決方法
1、轉子密封損壞	1、重新安裝或更換進(jìn)樣閥
2、定量環(huán)阻塞	2、更換定量環(huán)
3、進(jìn)樣口密封松動(dòng)	3、調整
4、進(jìn)樣針頭尺寸不合適	4、使用恰當的進(jìn)樣針
5、廢液管中產(chǎn)生虹吸	5、保持廢液管高于廢液液面
6、廢液管阻塞	6、更換或疏通廢液管

 

D、        色譜柱漏液

原 因	解決方法
1、尾端接頭松動(dòng)	1、擰緊接頭
2、卡套內有填料	2、拆下、清洗卡套、重新安裝
3、篩板厚度不合適	3、使用合適的篩板（參考下表）

 
篩板選擇指導

物質(zhì)粒徑	篩板孔徑
3-4u	0.5u
5-20u	2u

 

E、         檢測器漏液

原 因	解決方法
1、流通池墊片損壞	1、a、避免過(guò)大的背景壓力（壓力降） b、更換墊片
2、流通池窗破碎	2、更換窗口
3、手緊接頭漏液	3、擰緊或更換
4、廢液管阻塞	4、更換廢液管
5、流通池阻塞	5、重新安裝或更換

 
 
液相色譜系統的許多問(wèn)題都能在譜圖上反映出來(lái)。其中有一些問(wèn)題可以通過(guò)改變設備參數得到解決；而其他的問(wèn)題必須通過(guò)修改操作程序來(lái)解決。對于色譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。

 

A、        峰拖尾

原 因	解決方法
1、篩板阻塞	1、a、反沖色譜柱 b、更換進(jìn)口篩板 c、更換色譜柱
2、色譜柱塌陷	2、填充色譜柱
3、干擾峰	3、a、使用更長(cháng)的色譜柱 b、改變流動(dòng)相或更換色譜柱
4、流動(dòng)相PH選擇錯誤	4、調整PH值。對于堿性化合物，低PH值更有利于得到對稱(chēng)峰
5、樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生反應圖	5、a、加入離子對試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑 b、更改色譜柱

 

B、         峰前延

原 因	解決方法
1、柱溫低	1、升高柱溫
2、樣品溶劑選擇不恰當	2、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑
3、樣品過(guò)載	3、降低樣品含量
4、色譜柱損壞	4、見(jiàn)A1、A2

 

C、        峰分叉

原 因	解決方法
1、          保護柱或分析柱污染 圖	1、取下保護柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞，拆下來(lái)清洗。如果問(wèn)題仍然存在，可能是柱子被強保留物質(zhì)污染，運用適當的再生措施。如果問(wèn)題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。
2、樣品溶劑不溶于流動(dòng)相	2、改變樣品溶劑。如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。

 

D、        峰變形

原 因	解決方法
1、樣品過(guò)載	1、減少樣品載量

 

E、         早出的峰變形

原 因	解決方法
1、樣品溶劑選擇不恰當	1、a、減少進(jìn)樣體積 b、運用低極性樣品溶劑

 

F、         早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

原 因	解決方法
1、柱外效應	1、a、調整系統連接（使用更短、內徑更小的管路） b、使用小體積的流通池

 

G、        K’增加時(shí)，脫尾更嚴重

原 因	解決方法
1、二級保留效應，反相模式	1、a、加入三乙胺（或堿性樣品） b、加入乙酸（或酸性樣品） c、加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品） d、更換一支柱子
2、二級保留效應，正相模式	2、a、加入三乙胺（或堿性樣品） b、加入乙酸（或酸性樣品） c、加入水（或多官能團化合物） d、試用另一種方法
3、二級保留效應，離子對	3、加入三乙胺（或堿性樣品）

 

H、        酸性或堿性化合物的峰拖尾

原 因	解決方法
1、緩沖不合適	1、a、使用濃度50-100mM的緩沖液 b、使用Pka等于流動(dòng)相PH值的緩沖液

 

I、            額外的峰

原 因	解決方法
1、樣品中有其他組份	1、正常
2、前一次進(jìn)樣的洗脫峰	2、a、增加運行時(shí)間或梯度斜率 b、提高流速
3、空位或鬼峰	3、a、檢查流動(dòng)相是否純凈 b、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑 c、減少進(jìn)樣體積

 

J、           保留時(shí)間波動(dòng)

原 因	解決方法
1、溫控不當	1、調好柱溫
2、流動(dòng)相組分變化	2、防止變化（蒸發(fā)、反應等）
3、色譜柱沒(méi)有平衡	3、在每一次運行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱

 

K、        保留時(shí)間不斷變化

原 因	解決方法
1、流速變化	1、重新設定流速
2、泵中有氣泡	2、從泵中除去氣泡
3、流動(dòng)相選擇不恰當	3、a、更換合適的流動(dòng)相 b、選擇合適的混合流動(dòng)相

 

L、         基線(xiàn)漂移

原 因	解決方法
1、柱溫波動(dòng)。（即使是很小的溫度變化都會(huì )引起基線(xiàn)的波動(dòng)。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類(lèi)檢測器。）	1、控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器 圖
2、流動(dòng)相不均勻。（流動(dòng)相條件變化引起的基線(xiàn)漂移大于溫度導致的漂移。）	2、使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣，使用中使用氦氣。
3、流通池被污染或有氣體	3、用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸）
4、檢測器出口阻塞。（高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線(xiàn)）	4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。
5、流動(dòng)相配比不當或流速變化	5、更改配比或流速。為避免這個(gè)問(wèn)題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。
6、柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)	6、用中等強度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對柱子進(jìn)行沖洗。
7、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成	7、檢查流動(dòng)相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑
8、樣品中有強保留的物質(zhì)（高K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現出一個(gè)逐步升高的基線(xiàn)。	8、使用保護柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過(guò)程中，定期用強溶劑沖洗柱子。
9、使用循環(huán)溶劑，但檢測器未調整。	9、重新設定基線(xiàn)。當檢測器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí)，使用新的流動(dòng)相。
10、檢測器沒(méi)有設定在最大吸收波長(cháng)處。	10、將波長(cháng)調整至最大吸收波長(cháng)處

 

M、       基線(xiàn)噪音（規則的）

原 因	解決方法
1、在流動(dòng)相、檢測器或泵中有空氣	1、流動(dòng)相脫氣。沖洗系統以除去檢測器或泵中的空氣。
2、漏液 圖	2、見(jiàn)第三部分。檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。
3、流動(dòng)相混合不完全	3、用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑
4、溫度影響（柱溫過(guò)高，檢測器未加熱）	4、減少差異或加上熱交換器
5、在同一條線(xiàn)上有其他電子設備	5、斷開(kāi)LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來(lái)自于外部，加以更正。
6、泵振動(dòng)	6、在系統中加入脈沖阻尼器

 

N、        基線(xiàn)噪音（不規則的）

原 因	解決方法
1、          漏液 圖	1、見(jiàn)第三部分。檢查接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。
2、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成	2、檢查流動(dòng)相的組成。
3、流動(dòng)相各溶劑不相溶	3、選擇互溶的流動(dòng)相
4、檢測器/記錄儀電子元件的問(wèn)題	4、斷開(kāi)檢測器和記錄儀的電源，檢查并更正。
5、系統內有氣泡	5、用強極性溶液清洗系統
6、檢測器內有氣泡	6、清洗檢測器，在檢測器后面安裝背景壓力調節器
7、流通池污染（即使是極少的污染物也會(huì )產(chǎn)生噪音。）	7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池
8、檢測器燈能量不足	8、更換燈
9、色譜柱填料流失或阻塞	9、更換色譜柱
10、流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常	10、維修或更換混合器，在流動(dòng)相不走梯度時(shí)，建議不使用泵的混合裝置

 

O、        寬峰

原 因	解決方法
1、流動(dòng)相組成變化	1、重新制備新的流動(dòng)相
2、流動(dòng)相流速太低	2、調節流速
3、漏液（特別是在柱子和檢測器之間）	3、見(jiàn)section 3。檢查接頭是否松動(dòng)、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。
4、檢測器設定不正確	4、調整設定
5、柱外效應影響 a、柱子過(guò)載 b、檢測器對反應時(shí)間或池體積響應過(guò)大 c、柱子與檢測器之間的管路太長(cháng)或管路內徑太大 d、記錄儀響應時(shí)間太長(cháng) 圖	5、 a、 小體積進(jìn)樣（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀釋樣品 b、減少響應時(shí)間或使用更小的流通池 c、 使用內徑為0.007-0.01的短管路 d、減少響應時(shí)間
6、緩沖液濃度太低	6、增加濃度
7、保護柱污染或失效	7、更換保護柱
8、色譜柱污染或失效，塔板數較低	8、更換同樣類(lèi)型的色譜柱。如果新柱子可以提供對稱(chēng)的色譜峰，則用強溶劑沖洗舊柱子。
9、柱入口塌陷	9、打開(kāi)柱入口，填補塌陷或更換柱子
10、呈現兩個(gè)或多個(gè)未被完全分離的物質(zhì)的峰	10、選擇其它類(lèi)型的色譜柱以改善分離效果
11、柱溫過(guò)低	11、提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過(guò)75℃
12、檢測器時(shí)間常數太大	12、使用較小的時(shí)間常數

 

P、         分離度降低

原 因	解決方法
1、流動(dòng)相污染或變質(zhì)（引起, 保留時(shí)間變化）	1、重新配置流動(dòng)相
2、保護柱或分析柱阻塞 圖	2、去掉保護柱進(jìn)行分析。如果必要則更換保護柱。如果分析柱阻塞，可進(jìn)行反沖。如果問(wèn)題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞，建議使用恰當的再生程序。如果問(wèn)題仍然存在，進(jìn)口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。

 

Q、        所有的峰面積都太小

原 因	解決方法
1、檢測器衰減設定過(guò)高	1、減少衰減的設定
2、檢測器時(shí)間常數設定太大	2、設定較小的時(shí)間常數
3、進(jìn)樣量太少	3、增大進(jìn)樣量
4、記錄儀連接不當	4、使用正確的連接

 

R、        所有的峰面積都太大

原 因	解決方法
1、檢測器衰減設定過(guò)低	1、采取較大的衰減
2、進(jìn)樣過(guò)多	2、減少進(jìn)樣量
3、記錄儀連接不正確	3、正確連接記錄儀

 
 
以下問(wèn)題在使用進(jìn)樣閥過(guò)程中有可能發(fā)生。

 

A、        手動(dòng)進(jìn)樣閥，轉動(dòng)不靈

原 因	解決方法
1、轉子密封損壞	1、更換或調整轉子密封
2、轉子太緊	2、調整轉子的松緊度

B、         手動(dòng)進(jìn)樣閥，載樣困難

原 因	解決方法
1、進(jìn)樣閥安裝不當	1、重新安裝
2、定量環(huán)阻塞	2、清洗或更換定量環(huán)
3、進(jìn)樣器污染	3、清洗或更換進(jìn)樣器
4、管路阻塞	4、清洗或更換管路

 

C、        自動(dòng)進(jìn)樣閥，不能轉動(dòng)

原 因	解決方法
1、無(wú)壓力（或電源）	1、提供恰當的壓力（電源）
2、轉子太緊	2、調整轉子的松緊度
3、進(jìn)樣閥安裝不當	3、重新安裝

 

D、        自動(dòng)進(jìn)樣閥，其它問(wèn)題

原 因	解決方法
1、阻塞	1、清洗或更換阻塞部件
2、機械故障	2、見(jiàn)隨機維修手冊
3、控制器故障	3、維修或更換控制器

 
 
由氣味、景象和聲音可以發(fā)現的問(wèn)題
 
你需要運用你所有的感官去發(fā)現液相色譜的問(wèn)題。你最好養成習慣，每天花上幾分鐘運用你的感官（除了味覺(jué)）來(lái)“感覺(jué)”你的液相色譜是否存在問(wèn)題，這樣可以幫助你迅速找到問(wèn)題所在。例如：在你看到漏液之前，你可能首先聞到它的氣味。大部分的問(wèn)題是可以通過(guò)眼睛看到。

 

A、        溶劑的氣味

原 因	解決方法
1、漏液	1、見(jiàn)section 3
2、濺出	2、a、檢查廢液瓶是否已滿(mǎn) b、找到濺出的部位并清洗干凈

 

B、         熱氣味

原 因	解決方法
1、儀器過(guò)熱	1、a、檢查并調節通風(fēng)設施 b、檢查并調節溫度設定 c、關(guān)掉儀器，查找維修手冊

 

C、        讀數不正常

原 因	解決方法
1、壓力不正常	1、見(jiàn)section 2
2、柱溫箱問(wèn)題	2、 a、檢查并調節設定 b、參照用戶(hù)手冊
3、檢測器燈失效	3、更換燈

 

D、        燈警告

原 因	解決方法
1、壓力超出極限值	1、 a、檢查是否阻塞 b、檢查并調節極限值的設定
2、其它警示燈	2、見(jiàn)用戶(hù)手冊

 

E、         警告音

原 因	解決方法
1、溶劑泄漏/濺出	1、找到并解決
2、其它警告音	2、見(jiàn)用戶(hù)手冊

 

F、         刺耳的短音或長(cháng)音

原 因	解決方法
1、軸承失效	1、見(jiàn)用戶(hù)手冊
2、潤滑不夠	2、進(jìn)行恰當的潤滑
3、機械故障	3、見(jiàn)用戶(hù)手冊

 
  
常見(jiàn)故障及日常維護
下表中列出了液相色譜常見(jiàn)的一些問(wèn)題，右側中則列出的日常維護的方法可以減少問(wèn)題出現的頻率。括號中的數字是建議進(jìn)行維護的時(shí)間間隔。用戶(hù)手冊則提供您更多的維護方法。
 
溶劑瓶

問(wèn) 題	維 護
1、進(jìn)口篩板阻塞	1、 a、更換（3-6個(gè)月） b、過(guò)濾流動(dòng)相，0.5u濾膜
2、氣泡	2、流動(dòng)相脫氣

泵

問(wèn) 題	維 護
1、氣泡	1、流動(dòng)相脫氣
2、泵密封損壞	2、更換（3個(gè)月）
3、單向閥損壞	3、過(guò)濾流動(dòng)相，運用在線(xiàn)過(guò)濾，準備備用單向閥

進(jìn)樣閥

問(wèn) 題	維 護
1、轉子密封損壞	1、 a、不要擰的過(guò)緊 b、過(guò)濾樣品

色譜柱

問(wèn) 題	維 護
1、篩板阻塞	1、a、過(guò)濾流動(dòng)相 b、過(guò)濾樣品 c、運用在線(xiàn)過(guò)濾或保護柱
2、柱頭塌陷	2、a、避免使用PH>8的流動(dòng)相（針對大部分硅膠的柱子） b、使用保護柱 c、使用預柱（飽和色譜柱）

檢測器

問(wèn) 題	維 護
1、燈失效，檢測器響應降低，噪音增大	1、更換（6個(gè)月）或準備備用燈
2、流通池有氣泡	2、a、保持流通池清潔 b、池后使用反壓抑制器 c、流動(dòng)相脫氣

一般

問(wèn) 題	維 護
1、腐蝕/摩擦損壞	1、在不使用時(shí)保持系統緩沖液的清潔

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